فرمت فایل | word, pdf |
---|
بررسی ارتباط بین سطح پلاسمایی اندوتلین-1 و پلیمورفیسم ژن آن با فشار خون بالا و گرفتگی عروق کرونر
چکیده
مقدمه: اندوتلین-1 که به وسیله سلولهای اندوتلیال عروقی ترشح میشود، به عنوان مهم ترین تنگ کننده عروقی شناخته شده است. برخی مطالعات اثر مستقیم این پپتید و فرمهای خاصی از ژن تولید کنندهی آن را در بروز بعضی از بیماریهای سیستم قلبی-عروقی نشان داده اند. این مطالعه با هدف بررسی ارتباط بین سطح پلاسمایی اندوتلین-1 و دو پلیمورفیسم از ژن آن (rs5370 ,rs10478694) با ایجاد فشار خون بالا و تنگی عروق کرونر انجام شد.
روش: در این مطالعه 128 زن و132مرد با میانگین سنی5/10± 56 و شاخص توده بدنی 9/4± 25 انتخاب و در 4 گروه دسته بندی شدند. افراد دارای فشار خون بدون گرفتگی عروق کرونر H+A-، افراد دارای فشار خون و گرفتگی عروق کرونرH+A+، افراد بدون فشار خون و دارای گرفتگی عروق کرونرH-A+، افراد بدون فشار خون و بدون گرفتگی عروق کرونر H-A- یا به عبارتی گروه کنترل. سپس 10 سی سی خون در حالت ناشتا در لوله حاوی EDTA گرفته و پس از جداسازی پلاسما جهت اندازه گیری میزان اندوتلین-1، مابقی ویال حاوی خون بیماران برای استخراج DNA در دمای 70- درجه سانتی گراد نگهداری شدند. میزان پلاسمایی اندوتلین-1 با استفاده از روش الیزا اندازه گیری شد. DNA ژنومیک به روش رسوب زدایی نمک، جداسازی و ژنوتیپهای مربوط به هر پلیمورفیسم با استفاده از روش PCR-RFLP تعیین شدند. برای آنالیز آماری از نرم افزار spss 22 استفاده شد.
یافته ها: میانگین سطح پلاسمایی اندوتلین-1 در گروه H+A+ نسبت به سایر گروهها به طور معنی داری بیشتر بود. در بررسی پلی مورفیسم rs5370 مشخص شد که فراوانی آلل T در گروه H-A+ به طور معنی داری از سایر گروهها بیشتر است. در بررسی پلی مورفیسمrs10478694 در افراد دارای فشار خون بالا فراوانی آلل 3A بیشتر از افراد سالم است. میزان اندوتلین-1 در گروههای مختلف مورد مطالعه با شاخص Gensini Score ، تعداد عروق کرونری مسدود شده و هیج کدام از ژنوتیپهای دو پلیمورفیسم rs5370 و rs10478694 ارتباط معنی داری را نشان نداد.
نتیجه گیری: طبق یافته های این مطالعه،اندوتلین-1 با خطر بروز بیماری فشارخون و ایجاد گرفتگی در عروق کرونر ارتباط مستقیم دارد. آلل T از پلیمورفیسم rs5370 در ایجاد آترواسکلروز موثر بوده و میتواند یک فاکتور خطر در بروز آترواسکلروز تلقی شود. به همین ترتیب آلل 3A برای بروز فشار خون بالا فاکتور خطر محسوب میشود.
کلمات کلیدی: اندوتلین -1 ، فشار خون بالا ، گرفتگی عروق کرونر ، rs5370, rs1046872، پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی
فهرست مطالب
1-1-1- اندوتلين -1، ماهیت و نقشهای آن در بدن. 2
3-1-1- گيرنده هاي اندوتلين -1. 5
6-1-1- پلیمورفیسم تک نوکلئوتیدی(SNP ). 8
7-1-1- جایگاه rs5370 بر روی ژن انسان. 9
8-1-1- جایگاه rs10478694 بر روی ژن انسان. 9
1-1-2- اندوتلین-1 و فشارخون بالا. 14
2-1-2- اندوتلین-1 و گرفتگی عروق کرونر: 15
3-1-2- پلی مورفیسم(rs5370) و فشارخون بالا. 16
4-1-2- پلی مورفیسم( rs10478694) و فشارخون بالا 17
5-3- استخراج DNA با استفاده از روش Salting out 22
7-3- بررسی پلی مورفیسم rs5370 به روش PCR-RFLP.. 25
1-7-3- توالی محصول PCR ژن اندوتلین-1 در جایگاه rs5370 26
2-7-3- بررسی فراوانی ژنوتیپهای پلی مورفیسم rs5370 به روش RFLP.. 26
8-3 تکثیر پلی مورفیسم rs10478694 به روش PCR-RFLP.. 27
1-8-3- توالی محصول PCRژن اندوتلین-1 در جایگاه rs10478694.. 28
9-3- سنجش میزان پلاسمایی اندوتلین-1 30
1-4- نتایج الکتروفورز محصولات PCR و هضم توسط آنزیمها 34
1-4- میزان پلاسمایی اندوتلین-1 39
3-4- پلی مورفیسم rs10478694: 42
4-4- ارتباط اندوتلین-1 با درجه گرفتگی عروق کرونر. 45
5-4- بررسی ارتباط توزیع ژنوتیپهای دو پلیمورفیسم مورد بررسی با تعداد عروق مسدود شده 46
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری.. 48
فهرست جدول ها
جدول 1-3) لیست وسایل مورد نیاز……………………………………………………………………………….. 20
جدول 2-3) مشخصات دستگاههای مورد استفاده در این پژوهش………………………………………… 20
جدول 3-3) گروه های مورد مطالعه……………………………………………………………………………….. 21
جدول4-3) پرایمرهای مورد استفاده برای تکثیر ژن rs5370………………………………………………. 25
جدول5-3) غلظت مواد مورد استفاده جهت تکثیر ژن rs5370…………………………………………… 25
جدول6-3)شرایط دمایی مورد استفاده برای تکثیر زن rs5370…………………………………………… 25
جدول7-3)غلظت مواد مورد استفاده جهت هضم محصول ژن rs5370……………………………….. 26
جدول8-3) پرایمرهای مورد استفاده برای تکثیر زن rs10478694 …………………………………… 28
جدول9-3) شرایط دمایی مورد استفاده برای تکثیر زن rs10478694 ……………………………….. 28
جدول1-4) شاخصهای مرکزی وپراکندگی متغیرهای کمی به تفکیک گروههای مورد مطالعه…….. 36
جدول2-4) توزیع متغیرهای کیفی در بین چهارگروه مورد مطالعه……………………………………….. 38
جدول 3-4) فراوانی ژنوتیپها و آللهای مربوط به پلیمورفیسمrs5370………………………………….. 41
جدول4-4) فراوانی ژنوتیپها و آللهای مربوط به پلیمورفیسم rs10478694…………………………. 43
جدول 5-4) بررسی ارتباط نوع ژنوتیپهای مربوط به پلیمورفیسمrs10478694 با میزان اندوتلین-1 به تفکیک چهار گروه مورد مطالعه……………………………………………………………………………………………………….. 44
جدول 6-4) بررسی ارتباط اندوتلین-1 با شاخص گرفتگی عروق (GensiniScore) با استفاده از به تفکیک دو گروه………………………………………………………………………………………………………………………………… 45
جدول7-4) بررسی ارتباط پلی مورفیسمrs5370 با تعداد عروق کرونری مسدود شده به تفکیک دو گروه. 46
جدول 8-4) بررسی ارتباط پلی مورفیسم rs10478694 با تعداد عروق کرونری مسدود شده به تفکیک دو گروه………………………………………………………………………………………………………………………………… 46
فهرست اشکال و نمودارها
شکل1-1) ایزوفرمهای اندوتلین………………………………………………………………………………………. 2
شکل2-1) ساختاراندوتلین-1………………………………………………………………………………………….. 3
شکل3-1) شمایی از نحوه ی عملکرد اندوتلین از طریق گیرنده هایETA و ETB در سلولهای اندوتلیال و ماهیچه صاف………………………………………………………………………………………………………………………….. 6
شکل4-1) مقایسه مکانیسم عمل اندوتلین از طریق گیرنده هایETA و ETB در دو حالت سلامت و ناکارامدی اندوتلیال……………………………………………………………………………………………………………………… 7
شکل 1-3) محل برش آنزیم Cac8i در ژن اندوتلین-1…………………………………………………. 27
شکل2-3 )محل برش آنزیم Bsl1 در ژن اندوتلین-1………………………………………………………… 29
شکل 3-3) جایگاه اثر آنزیمهای Cac8i و Bsl1……………………………………………………………… 29
شکل1-4) باندهای تشکیل شده پس از الکتروفورز محصول PCR ژنrs5370 و rs10478694 34
شکل2-4) باندهای تشکیل شده پس از اثر آنزیم Cac8i بر روی محصول PCR ژن rs5370 . 35
شکل3-4) باندهای تشکیل شده پس از اثر آنزیم Bsl1 بر روی محصول PCR ژن rs10478694 36
نمودار 1-4) مقایسه میزان پلاسمایی اندوتلین-1 در بین چهار گروه مورد مطالعه…………………….. 40
منابع فارسی
بدون منبع فارسی
منابع انگلیسی
- Bagnato A, Rosanò L. The endothelin axis in cancer. The international journal of biochemistry & cell biology. 2008;40(8):1443-51.
- Nussdorfer GG, Rossi GP, Malendowicz LK, Mazzocchi G. Autocrine-paracrine endothelin system in the physiology and pathology of steroid-secreting tissues. Pharmacological reviews. 1999;51(3):403-38.
- Masaki T. Historical review: endothelin. Trends in pharmacological sciences. 2004;25(4):219-24.
- Lüscher TF, Barton M. Endothelins and endothelin receptor antagonists therapeutic considerations for a novel class of cardiovascular drugs. Circulation. 2000;102(19):2434-40.
- Khimji A-k, Rockey DC. Endothelin—biology and disease. Cellular signalling. 2010;22(11):1615-25.
- Schiffrin E. Endothelin: potential role in hypertension and vascular hypertrophy. Hypertension. 1995;25(6):1135-43.
- Nelson J, Bagnato A, Battistini B, Nisen P. The endothelin axis: emerging role in cancer. Nature Reviews Cancer. 2003;3(2):110-6.
- Masaki T. The endothelin family: an overview. J Cardiovasc Pharmacol. [10.1097/00005344-200000002-00002]. 2000 //;35:S3-S5.
- Vignon-Zellweger N, Heiden S, Miyauchi T, Emoto N. Endothelin and endothelin receptors in the renal and cardiovascular systems. Life Sci. 2012 Oct 15;91(13-14):490-500.
- Barst RJ. A review of pulmonary arterial hypertension: role of ambrisentan. Vascular health and risk management. 2007;3(1):11.
- Böhm F, Pernow J. The importance of endothelin-1 for vascular dysfunction in cardiovascular disease. Cardiovascular research. 2007;76(1):8-18.
- Liu H, Peng Y, Liu F, Liu Y, Ouyang L, Xiao W, et al. Correlation between endothelin-1 and atherosclerosis in chronic hemodialysis patients. JN journal of nephrology. 2010;23(5):593.
- Goch A, Banach M, Mikhailidis DP, Rysz J, Henryk Goch J. Endothelial dysfunction in patients with noncomplicated and complicated hypertension. Clinical and experimental hypertension. 2009;31(1):20-30.
- Hollegaard MV, Grove J, Thorsen P, Wang X, Mandrup S, Christiansen M, et al. Polymorphisms in the tumor necrosis factor alpha and interleukin 1-beta promoters with possible gene regulatory functions increase the risk of preterm birth. Acta obstetricia et gynecologica Scandinavica. 2008;87(12):1285-90.
- Bousette N, Giaid A. Endothelin-1 in atherosclerosis and other vasculopathies. Canadian journal of physiology and pharmacology. 2003;81(6):578-87.
- Piranfar MA. The Correlation between high-sensitivity C-reactive protein (hsCRP) serum levels and severity of coronary atherosclerosis. International cardiovascular research journal. 2014;8(1):6.
- Syvanen A-C, Landegren U, Isaksson A, Gyllensten U, Brookes A. Enthusiasm mixed with skepticism about singlenucleotide polymorphism markers for dissecting complex disorders. Eur J Hum Genet. 1999;7:98-101.
- Stewart DJ, Levy RD, Cernacek P, Langleben D. Increased plasma endothelin-1 in pulmonary hypertension: marker or mediator of disease? Annals of internal medicine. 1991;114(6):464-9.
- Parrinello G, Scaglione R, Pinto A, Corrao S, Cecala M, Di Silvestre G, et al. Central obesity and hypertension The role of plasma endothelin. American journal of hypertension. 1996;9(12):1186-91.
- Panoulas VF, Douglas KM, Smith JP, Taffe P, Stavropoulos-Kalinoglou A, Toms TE, et al. Polymorphisms of the endothelin-1 gene associate with hypertension in patients with rheumatoid arthritis. Endothelium. 2008 Jul-Aug;15(4):203-12.
- Ferri C, Bellini C, Desideri G, Di Francesco L, Baldoncini R, Santucci A, et al. Plasma endothelin-1 levels in obese hypertensive and normotensive men. Diabetes. 1995;44(4):431-6.
- Esteghamati A, Abbasi M, Alikhani S, Gouya MM, Delavari A, Shishehbor MH, et al. Prevalence, awareness, treatment, and risk factors associated with hypertension in the Iranian population: the national survey of risk factors for noncommunicable diseases of Iran. American journal of hypertension. 2008;21(6):620-6.
- Sarafidis PA, Bakris GL. Insulin and endothelin: an interplay contributing to hypertension development? The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 2007;92(2):379-85.
- Giaid A, Yanagisawa M, Langleben D, Cacoub P, Dorent R, Maistre G, et al. Endothelin-1 in pulmonary hypertension. The New England journal of medicine. 1993;1993(329):1967-8.
- Ames RS, Sarau HM, Chambers JK, Willette RN, Aiyar NV, Romanic AM, et al. Human urotensin-II is a potent vasoconstrictor and agonist for the orphan receptor GPR14. Nature. 1999;401(6750):282-6.
- Yoshibayashi M, Nishioka K, Nakao K, Saito Y, Matsumura M, Ueda T, et al. Plasma endothelin concentrations in patients with pulmonary hypertension associated with congenital heart defects. Evidence for increased production of endothelin in pulmonary circulation. Circulation. 1991;84(6):2280-5.
- Iglarz M, Schiffrin EL. Role of endothelin-1 in hypertension. Current hypertension reports. 2003;5(2):144-8.
- Diefenbach K, Nahad FA, Meisel C, Fietze I, Cascorbi I, Stangl K, et al. Identification of twelve polymorphisms in the endothelin-1 gene by use of fluorescently labeled oligonucleotides and PCR with restriction fragment polymorphism analysis. Clinical chemistry. 2004;50(2):448-51.
- Lerman A, Holmes DR, Bell MR, Garratt KN, Nishimura RA, Burnett JC. Endothelin in coronary endothelial dysfunction and early atherosclerosis in humans. Circulation. 1995;92(9):2426-31.
- Lerman A, Webster M, Chesebro JH, Edwards WD, Wei CM, Fuster V, et al. Circulating and tissue endothelin immunoreactivity in hypercholesterolemic pigs. Circulation. 1993;88(6):2923-8.
- Zeiher AM, Goebel H, Schächinger V, Ihling C. Tissue Endothelin-1 Immunoreactivity in the Active Coronary Atherosclerotic Plaque A Clue to the Mechanism of Increased Vasoreactivity of the Culprit Lesion in Unstable Angina. Circulation. 1995;91(4):941-7.
- Jesmin S, Zaedi S, Maeda S, Togashi H, Yamaguchi I, Goto K, et al. Endothelin antagonism suppresses plasma and cardiac endothelin-1 levels in SHRSPs at the typical hypertensive stage. Experimental Biology and Medicine. 2006;231(6):919-24.
- McCarter SD, Lai PF, Suen RS, Stewart DJ. Regulation of endothelin-1 by angiopoietin-1: implications for inflammation. Experimental Biology and Medicine. 2006;231(6):985-91.
- Pernow J, Shemyakin A, Böhm F. New perspectives on endothelin-1 in atherosclerosis and diabetes mellitus. Life sciences. 2012;91(13):507-16.
- Sayama H, Nakamura Y, Saito N, Konoshita M. Does the plasma endothelin-1 concentration reflect atherosclerosis in the elderly? Gerontology. 1999;45(6):312-6.
- Ihling C, Szombathy T, Bohrmann B, Brockhaus M, Schaefer HE, Loeffler BM. Coexpression of endothelin-converting enzyme-1 and endothelin-1 in different stages of human atherosclerosis. Circulation. 2001;104(8):864-9.
- Noshad H, Argani H, Nezami N, Ghojazadeh M, Zomorrodi A, Bohlouli A, et al. Arterial atherosclerosis in patients with chronic kidney disease and its relationship with serum and tissue. Iranian journal of kidney diseases. 2009;3(4):203-9.
- Tiret L, Poirier O, Hallet V, McDonagh TA, Morrison C, McMurray JJ, et al. The Lys198Asn polymorphism in the endothelin-1 gene is associated with blood pressure in overweight people. Hypertension. 1999;33(5):1169-74.
- Treiber FA, Barbeau P, Harshfield G, Kang H-S, Pollock DM, Pollock JS, et al. Endothelin-1 gene Lys198Asn polymorphism and blood pressure reactivity. Hypertension. 2003;42(4):494-9.
- Calabro P, Limongelli G, Maddaloni V, Vizza CD, D’Alto M, D’Alessandro R, et al. Analysis of endothelin-1 and endothelin-1 receptor A gene polymorphisms in patients with pulmonary arterial hypertension. Internal and emergency medicine. 2012;7(5):425-30.
- Dzholdasbekova A, Gaipov A. The association between polymorphism of Lys198Asn of endothelin-1 gene and arterial hypertension risk in Kazakh people. European Journal of General Medicine. 2010;7(2).
- Seremak-Mrozikiewicz A, Barlik M, Perlik M, Kurzawińska G, Drews K. [Genetic variability of endothelin-1 system in gestational hypertension and preeclampsia]. Ginekologia polska. 2011;82(5):363-70.
- Vadapalli S, Rani HS, Sastry B, Nallari P. Endothelin-1 and endothelial nitric oxide polymorphisms in idiopathic pulmonary arterial hypertension. Int J Mol Epidemiol Genet. 2010;1(3):208-13.
- Vasku A, Holla LI, Tschplova S, Muzik J, Soucek M, Vacha J. An association of three polymorphisms in the gene coding for endothelin-1 (ET-1) in essential hypertension. Atherosclerosis. 2000;151(1):255.
- Ibrahim E, Kassem A, Zakaria N. The role of the biomarker and the genetic polymorphism of endothelin-1 in pulmonary arterial hypertension among Egyptians. Egyptian Journal of Chest Diseases and Tuberculosis. 2012;61(4):495-500.
- Lajemi M, Gautier S, Poirier O, Baguet J-P, Mimran A, Gosse P, et al. Endothelin gene variants and aortic and cardiac structure in never-treated hypertensives. American journal of hypertension. 2001;14(8):755-60.
- Miller S, Dykes D, Polesky H. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic acids research. 1988;16(3):1215.
- Katona E, Settakis G, Varga Z, Paragh G, Bereczki D, Fulesdi B, et al. Target-organ damage in adolescent hypertension. Analysis of potential influencing factors, especially nitric oxide and endothelin-1. J Neurol Sci. 2006 Sep 25;247(2):138-43.
- Rapoport RM. Nitric oxide inhibition of endothelin-1 release in the vasculature: in vivo relevance of in vitro findings. Hypertension. 2014 Nov;64(5):908-14.
- Wu Y, Duan S, Qiang X, Ning Z, Xing C, Zhang B. Sympathetic renal denervation in hypertension with chronic kidney disease: a case report and review of literature. Int J Clin Exp Med. 2015;8(9):16858-62.
- Kawashima S. Malfunction of vascular control in lifestyle-related diseases: endothelial nitric oxide (NO) synthase/NO system in atherosclerosis. Journal of pharmacological sciences. 2004 Dec;96(4):411-9.
محصولات مشابه
فرمت فایل | word, pdf |
---|---|
رشته | بیوشیمی بالینی |
تعداد صفحات | 80 |